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本试剂盒适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。

本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的植物核蛋白，回收率提高，纯度高，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，提取得到的蛋白活性优于酶法提取，但是回收率相比酶法较低。如需要更加快捷的提取试剂盒，可选择非酶法的提取试剂盒(HR8053)，对提取速度没有要求的话，可选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 提取液A长期不用请置-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液制备：
  将试剂B1和试剂B2混合，配成蛋白提取液B，充分混匀备用。
  每500μL提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取500mg～1g新鲜植物叶片样本，用纯水洗净擦干后去除叶梗和粗脉，用手术剪刀或锋利的刀片剪切碎，切成0.5mm*0.5mm细块。
  
• 加入500μL提取液C，充分混匀。
  
• 将悬液置振荡器上室温振荡12～72小时。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，保证提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器轻轻吹打混匀即可。
  ● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。
  ● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高得率。
  
• 在1000×g条件下离心5～10分钟，弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 有条件可以用100μm细胞筛网过滤提取液处理液后，收集滤液再离心。
  ● 没有细胞筛可以不过滤。。
  
• 在沉淀中加入1mL提取液A后用匀浆机充分匀浆或者用匀浆器充分匀浆。
  
• 将匀浆用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 液体量少时可以加入1～2mL PBS混匀后再用细胞筛过滤。
  ● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液静置1分钟，待大的没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。
  ● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。
  
• 将滤液在100×g条件下离心3分钟，弃沉淀，收集上清。
  注：
  ● 部分黏液较多的植物样本可能很粘稠难以离心，可以加入1～2mL PBS稀释，充分混匀后再离心。
  
• 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入150～250μL提取液B，充分混匀。
  
• 置振荡器2～8℃振荡30～45分钟。
  注：
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
  ● 没有低温振荡条件可以不振荡，在2～8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
  
• 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
  注：
  ● 蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。
  ● 经透析或脱盐离心柱处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。

• 蛋白浓度低？
  植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取时出现胶状沉淀？
  蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。